síðu_borði

Fréttir

Algengar spurningar um frumurækt

1. Ef ég fæ rör af frosnum frumum, get ég sett það beint í fljótandi köfnunarefni til geymslu?

Í mörgum tilfellum er hægt að setja frumur sem fluttar eru á þurrís (-80°C) aftur í fljótandi köfnunarefni og þíða þær svo fljótt á eftir.Hins vegar getur lífvænleiki frumna minnkað eftir slíka meðferð.Fyrir sumar viðkvæmar frumulínur getur þetta gert endurheimt frumna erfiðara.Talið er að þetta fyrirbæri megi rekja til breytinga á byggingu ískristallanna innan frumanna vegna hitabreytinganna.Því er mælt með því að frumur séu þiðnar og ræktaðar eins fljótt og auðið er eftir móttöku.Minnkaðu geymslutímann við -80°C.Þetta hitastig er aðeins notað til flutnings.

Algeng frumurækt 1
Oft spurð frumumenning 2
Algeng frumurækt 4
Algeng frumurækt 3

2. Hvaða öryggisráðstafanir á að gera þegar frumur eru fjarlægðar úr fljótandi köfnunarefni til endurheimtar?

Frumuköfnunarrör í fljótandi köfnunarefni sem eru ekki alveg lokuð og með fljótandi köfnunarefni lekur inn í þau geta valdið sprengingu ef hitastig frystirörsins hækkar mikið við þiðnun.Því er mælt með því að nota hlífðargleraugu og hlífðarhanska þegar frumur eru fjarlægðar úr fljótandi köfnunarefni.Til endurlífgunar skal hrista frystirörið stöðugt í 37°C vatnsbaði til að þíða frystilausnina alveg innan 1-2 mínútna.Þurrkaðu síðan utan á túpunni með sprittþurrku, taktu það síðan inn í ofurhreint borð og færðu frumurnar yfir í skilvindurör með 10 ml af ræktunarefni bætt við, skildu við 1000 snúninga á mínútu í 5-10 mínútur, fargið flot, bæta við viðeigandi magni af ræktunarefni og sáð ræktunarflöskuna og ræktað í 5% CO2 útungunarvél.

3. Hvers vegna ætti að geyma frumur í gufufasa í fljótandi köfnunarefnisgeymi frekar en í fljótandi fasa?

Líklegra er að frumur sem eru geymdar í gasfasa fljótandi köfnunarefnis endurlífgast.Í fljótandi fasa fljótandi köfnunarefnis, ef frostþurrkunarrörin eru ekki almennilega lokuð eða leka, getur bein snerting milli frumanna og fljótandi köfnunarefnisins skaðað lífvænleika frumanna eftir þíðingu.

4. Hvað varðar sviflausnfrumur, hvernig breyti ég ræktunarmiðlinum?

Ræktun sviflausnarfrumna er hægt að gera með því einfaldlega að bæta við ferskum miðli (ef pláss leyfir) eða með því að aðskilja frumurnar frá gamla miðlinum með skilvindu (100 xg í 5 mínútur) og síðan endursviflausnar frumurnar í ferskum miðli.Hins vegar, fyrir flestar sviflausnarfrumulínur, er einfaldlega betri aðferð að bæta við miðli.Hvort heldur sem er þarf að endurnýja miðilinn áður en frumurnar ná sínum mesta mettunarþéttleika.Mettunarþéttleiki frumna er breytilegur á milli 3 x 10 5 og 2 x 10 6 eftir frumulínu og ræktunaraðstæðum (hvíld eða hræring, súrefnisstyrk o.s.frv.).Þynna þarf frumur niður í lægri frumustyrk til að hægt sé að endurheimta nægilega næringarefni til að halda frumunum í logaritmískum vexti.Ef einfaldlega er skipt um miðil án þess að minnka frumuþéttleika, munu frumurnar tæma miðilinn hratt og deyja.Ef frumurnar eru þynntar niður fyrir minnsta þéttleika fara þær í töf og vaxa mjög hægt eða deyja.Hver sviflausnfrumulína hefur mismunandi mettunarþéttleika og yfirferðarbil, þannig að daglegar frumutölur eru leiðin til að fylgjast með sviflausnarfrumulínum*.

5. Hvað er ráðlagt CO2 magn fyrir frumuræktun?

Þrátt fyrir að magn CO2 í frumuræktunarkerfum sé á bilinu 0,03% til 40% (venjulega um 0,03% CO2 í andrúmsloftinu), er mjög algengt að ekki sé bætt CO2 út í loftið eða styrkur CO2 er 5% til 10%.Mikilvægt er að stilla styrk natríumbíkarbónats í miðlinum til að ná jafnvægi við CO2 magnið í gasfasanum.Frumur framleiða CO2 og þurfa lítið magn af kolsýru til að vaxa og lifa af.Ef ekkert CO2 er bætt við og frumurnar eru að fjölga sér má nota 4 mM (0,34 g/L) af vatnsfríu natríumbíkarbónati.Hins vegar ætti að herða lokið á ræktunarflöskunni á þessum tímapunkti.Ef ræktunarkerfið krefst 5% eða 10% CO2, notaðu 23,5 mM (1,97 g/L) eða 47 mM (3,95 g/L) natríumbíkarbónat við 37°C, í sömu röð, með upphaflegt pH um það bil 7,6.Við þessar aðstæður ætti að skilja flöskuna eftir án loks eða nota petrí-skál til að viðhalda gasjafnvægi.

6. Af hverju þurfa sumar frumur natríumpýrúvat?Hversu miklu natríumpýruvat ætti ég að bæta við miðilinn?

Pyruvat er lífrænt sýruumbrotsefni í glýkólýsuleiðinni* sem fer auðveldlega inn í og ​​út úr frumunni.Þess vegna veitir það að bæta natríumpýruvati við miðilinn bæði orkugjafa og kolefnisgjafa fyrir vefaukningu, hjálpar til við að viðhalda ákveðnum sértækum frumum, hjálpar við klónun frumna eða er þörf þegar sermisþéttni í miðlinum minnkar.Natríumpýrúvat hjálpar einnig til við að draga úr frumueiturhrifum af völdum flúrljómunar.Natríumpýruvati er venjulega bætt við í lokastyrknum 1 mM.Natríumpýrúvatlausnir sem fást í verslun eru venjulega 100 mM geymslulausn (100X).

Þýtt með www.DeepL.com/Translator (ókeypis útgáfa).


Birtingartími: 21. júní 2022